USB HotStart-IT™ Taq DNA Polymerase

„Das Prinzip“

Wirft ihre Hot-Start-Methode mehr Fragen als Antworten auf?

• Ist meine PCR-Reaktion wirklich spezifisch?
• Können tierische Antikörper Kontaminationen einschleppen?
• Kann extensive Denaturierung meine DNA beschädigen?
• Kann ich mich auf meine Resultate verlassen?

Wenn sie sich diese Fragen stellen, sollten sie HotStart-IT™ Taq DNA Polymerase ausprobieren. Wissenschaftler von USB haben HotStart-IT™ entwickelt, eine neue elegante Methode, genannt Primer-Beschlagnahme (primer-sequestration), die ohne Antikörper oder chemisch modifizierte Enzyme auskommt.

Hot-Start-PCR Methoden haben den Vorteil, nicht spezifische Primerextensionsprodukte zu reduzieren oder sogar vollständig zu verhindern. Solche Produkte entstehen bei niedrigen Temperaturen, während die PCR-Rektion zusammenpipettiert wird, da bei weniger stringenten Temperaturen Primer unspezifisch binden können, was zu nicht spezifischen Amplifikationsprodukten führt. Ebenso können sich unerwünschte Primer-Dimers bilden, wodurch sich die Konzentration an Primern reduziert. Um Abhilfe für dieses Problem zu schaffen, hat USB HotStart-IT™ entwickelt. Es handelt sich um eine Mischung von USB Taq DNA Polymerase mit einem rekombinanten Protein, welches an die Primer bindet und diese somit bei niedrigeren Temperaturen beschlagnahmt, wodurch sie nicht mehr für unerwünschte Reaktionen zur Verfügung stehen. Falsches Priming und die Bildung von Primer-Dimers werden sehr effektiv blockiert. Wird die PCR gestartet, so wird das Protein bei der ersten Hitzedenaturierung inaktiviert und die Primer stehen für die – jetzt spezifischen – Reaktionen bei den Amplifikationszyklen wieder zur Verfügung.

Diese neue Hot-Start-Methode verbessert viele komplexe PCR-Reaktionen, indem sie Spezifität und Ausbeute erhöht. Da kein Taq-Antikörper benötigt wird, sind Kontaminationen vom Antikörperorganismus ausgeschlossen. Das Risiko der DNA-Beschädigung ist ebenfalls ausgeschlossen, da keine extensive Hitze-Denaturierung benötigt wird.

Das Ergebnis?
• Höhere Spezifität
• Größere Ausbeute
• Mehr Zuverlässigkeit

HotStart-IT™ Taq DNA Polymerase wird einer intensiven Qualitätskontrolle unterzogen, um Leistung und Reinheit zu gewährleisten. Das Produkt wird mit 10xReaktionspuffer und separater 25mM MgCl2-Lösung geliefert.

USB bietet ebenfalls eine vorgemischte Lösung mit HotStart-IT™ Taq Master Mix (2X) an. Diese Mischung kombiniert die hochwertige rekombinante USB Taq DNA Polymerase, ein ebenfalls rekombinantes Hot-Start-Protein und USB Ultrapure Nukleotide in einem Reaktionspuffer. Diese „ready-touse“ Mischung liefert robuste und zuverlässige Ergebnisse bei anspruchsvollen PCRAnwendungen, bei denen Spezifität und Sensitivität gefragt sind. Die vorformulierte Mischung reduziert experimentelle Variabilitäten.

Kontakt:
USB Europe GmbH
Hauptstraße 1
79219 Staufen
Germany
www.usbweb.com